金黃色葡萄球菌測(cè)試片
1、原理及適用范圍
金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus 簡(jiǎn)稱金葡菌)是人類最常見(jiàn)的致病菌之一，其侵襲力很強(qiáng)，能產(chǎn)生多種致病物質(zhì)如：腸毒素、凝固酶等；可引起化膿性炎癥、毒素性疾病及葡萄球菌性腸炎。金葡菌所引起的中毒事件已成為世界性的公共衛(wèi)生問(wèn)題，我國(guó)每年由金葡菌引起的食物中毒事件屢有報(bào)道。金黃色葡萄球菌測(cè)試(FilmplateTM Staphylococcus aureus BT206) 含有選擇性培養(yǎng)基和專一性的酶顯色劑，運(yùn)用微生物測(cè)試片專有技術(shù)，做成一次性快速檢驗(yàn)產(chǎn)品，一步培養(yǎng)15～24h就可確認(rèn)是否有病原菌的存在，大大地簡(jiǎn)化了檢測(cè)程序。本產(chǎn)品適用于各類生、熟食制品，飲料，糕點(diǎn)類，調(diào)味品，奶制品等的快速檢測(cè)。執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物檢驗(yàn)黃色葡萄球菌檢驗(yàn)（GB/T 4789.10-2010）。
2、操作方法
2.1、樣品處理：取樣品25mL（g）放入含有225mL滅菌磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)，制成1:10的樣品勻液，調(diào)節(jié)樣品勻液pH至6.0～8.0。用1mL滅菌吸管吸取1:10樣品勻液1mL，注入含有9mL稀釋液的試管內(nèi)，振搖后成為1:100的樣品勻液，以此類推，每次換一支吸管。
2.2、接種：一般食品選2～3個(gè)稀釋度進(jìn)行檢測(cè)，將金黃色葡萄球菌測(cè)試片（BT206）置于平坦實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，揭開(kāi)上層膜，用無(wú)菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置10s左右，使培養(yǎng)基凝固，每個(gè)稀釋度接種兩片。做一片空白陰性對(duì)照。
2.3、培養(yǎng)：將測(cè)試片疊在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過(guò)12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h。
3、結(jié)果判讀
培養(yǎng)后，測(cè)試片上紫紅色的菌落為金黃色葡萄球菌；呈藍(lán)色的菌落為其他大腸菌群。出現(xiàn)陽(yáng)性菌落的樣本，最好用其他更為可靠的方法進(jìn)行驗(yàn)證，沒(méi)有條件的至少要再取樣重復(fù)檢驗(yàn)一次。
4、計(jì)數(shù)原則及報(bào)告方式
4.1、選擇菌落數(shù)在20～200個(gè)之間的紙片進(jìn)行計(jì)數(shù)。
4.2、若兩個(gè)稀釋度的菌落數(shù)均在20～200之間，則取其平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，即為每毫升（或每克）樣品中金黃色葡萄球菌數(shù)。
4.3、如果所有稀釋度的測(cè)試片上的菌落數(shù)都小于20，則計(jì)數(shù)稀釋度最低的測(cè)試片上的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之；如果所有稀釋度的測(cè)試片上均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報(bào)告之。
4.4、如果所有稀釋度的菌落數(shù)都大于200，計(jì)數(shù)最高稀釋度的測(cè)試片上的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。計(jì)數(shù)菌落數(shù)大于200的測(cè)試片時(shí)，也可計(jì)數(shù)一個(gè)或兩個(gè)具有代表性的方格內(nèi)的菌落數(shù)，換算成單個(gè)方格內(nèi)的菌落數(shù)后乘以20（濾紙區(qū)面積為20cm2），即為測(cè)試片上估算的菌落數(shù)。報(bào)告單位以CFU/mL（或CFU/g）表示。
5、附加說(shuō)明
5.1、本產(chǎn)品對(duì)于提高衛(wèi)生行政監(jiān)督部門應(yīng)對(duì)細(xì)菌性食物中毒等突發(fā)性公共衛(wèi)生事件的能力，具有重要的作用。
5.2、山東省疾病預(yù)防控制中心的驗(yàn)證結(jié)果表明，當(dāng)金黃色葡萄球菌在0～9個(gè)菌落范圍內(nèi)時(shí)，測(cè)試片與血平板均能檢出，作為致病菌不得檢出的標(biāo)準(zhǔn)要求，可以作為金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)應(yīng)用。
5.3、經(jīng)試驗(yàn)，該測(cè)試片的檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。對(duì)純菌的檢測(cè)下限可達(dá)3cfu／mL，與營(yíng)養(yǎng)瓊脂計(jì)數(shù)、Baird-Parker培養(yǎng)計(jì)數(shù)和顯色培養(yǎng)基計(jì)數(shù)比較，檢測(cè)結(jié)果均無(wú)顯著差異。（食品研究與開(kāi)發(fā)2009，30（1）：94-97）
5.4、注意使用過(guò)的測(cè)試片上帶有活菌，需及時(shí)按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理。
6、保存條件
本產(chǎn)品需存放在4℃～10℃冰箱中，保質(zhì)期為一年，鋁箔袋打開(kāi)后,未用完的紙片要放回鋁箔袋中封好，放到冰箱中，一個(gè)月內(nèi)用完。在高濕度的環(huán)境中可能出現(xiàn)冷凝水，最好在拆封前將整包回溫至室溫。
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